alt tekst

Kennis delen

Omschrijving

Deze projectbeschrijving wordt binnenkort aangepast. 

Het prioneiwit (PrP) is een glycosyl-fosfatidyl-inositol (GPI)-verankerd glyco-eiwit wat zich bevindt in cholesterolrijke membraan-microdomeinen op het plasmamembraan. PrP is vooral bekend om zijn betrokkenheid bij fatale degeneratieve neuro-aandoeningen, waarbij de accumulatie van een verkeerd gevouwen isovorm van PrP de neurale schade veroorzaakt. Echter, de fysiologische functie van PrP blijft onduidelijk, hoewel een grote variëteit aan functies zijn voorgesteld. In endotheelcellen accumuleert PrP in de cel-cel verbindingen en lijkt cel-cel adhesie te stabiliseren. Echter, in maag kankers heeft PrP een pro-metastatische rol. PrP is ook betrokken geweest bij de lange termijn vernieuwing van hematopoëtische stamcellen.

We hebben onlangs ontdekt dat PrP leukocyten en endotheelcel migratie reguleert. Onze hypothese is dat PrP betrokken is bij de migratie van de modulatie van cel-cel en cel-matrix adhesie. Aangezien adhesie een zeer krachtige stimulans is, die cellulaire processen op een celspecifieke wijze reguleert, veronderstellen wij dat de regulatie van celadhesie door PrP aan de basis van de meervoudige functies ligt.

Onderzoeksvragen

1. Welke mechanismen zijn betrokken bij de regulatie van leukocyten en endotheelcellen celmigratie door PrP?
2. Reguleert PrP integrine- en VE-cadherine-gemedieerde adhesie?
3. Wat is de rol van PrP in lange termijn hematopoëtische stamcellen?

Project 8.1. Regulatie van cell-cell and cell-matrix adhesie door PrP: identificatie van het PrP moleculaire complex

Ons huidige onderzoek toont aan dat PrP celmigratie moduleert. Hechting aan de ondergrond en de naburige cellen is essentieel voor de cellen om te migreren. Wij willen onderzoeken of PrP betrokken is bij celadhesie door het identificeren van de eiwitten die de interactie aangaan met PrP op het plasmamembraan. Voor dit doel hebben we een PrP-variant gemaakt die alleen specifiek gelabeld kan worden wanneer deze tot expressie wordt gebracht op het celoppervlak.

Technieken

  • Kweken van primair menselijke endotheelcellen en leukocyten cellijnen
  • Cell transfection 
  • Pull-down assay 
  • Western-blotting 
  • Massa spectrometry analyse 
  • Confocal laser scanning microscopie
  • Cell migratie and adhesie assays 
  • Angiogenese assays

Project 8.2. Regulatie van hematopoëtische stamcel vernieuwing en differentiatie door PrP

PrP is nodig voor het onderhoud van de lange-termijn hematopoëtische stamcellen (HSCs). Echter, het werkingsmechanisme van PrP is nog onbekend. Wij willen de rol van PrP in de vernieuwing en differentiatie van humane HSC onderzoeken in een reeks van in vitro testen om HSC proliferatie en differentiatie van de verschillende hematopoëtische cellijnen waar PrP is uitgeschakeld te bepalen.

Technieken

  • Isolatie and kweken van HSCs
  • Uitschakelen van PrP by lentivirale transductie
  • SC differentiatie assays 
  • HSC proliferatie assays 
  • Fluorescence activated cell sorting (FACS)

 

Laatst bewerkt op: 15 oktober 2015