Stage: VE-cadherin verspreiding bij cel-cel verbindingen

Terug naar overzicht

Omschrijving

Het vasculaire endotheel scheidt weefsels van de circulatie en regelt de extravasatie van vloeistoffen, plasma-eiwitten en leukocyten. Veranderingen in de structurele integriteit van de endothele monolaag zijn essentieel voor ontstekingsreacties, maar kunnen resulteren in vasculaire lekkage bij verkeerde inductie. Het junctionele eiwit VE-cadherin is vooral van belang voor het behoud van de inter-endothele celcontacten in vasculaire endotheelcellen. Net als andere cadherines medieerd VE-cadherin de calciumafhankelijke homophilic adhesie. Daarnaast, bieden VE-cadherines in de cel plaats voor de aanhechting van het cytoskelet door interactie met een aantal cytoplasmatische eiwitten, de zogenaamde catenins. De mechanismen waarmee deze catenins (waaronder β-catenine en P120-catenine) VE-cadherin functie en distributie reguleren zijn niet bekend. In dit project zal de verspreiding van het VE-cadherin complex verder worden onderzocht met behulp van state-of-the-art immunofluorescentie microscopie.

Om de dynamiek van het VE-cadherin complex te onderzoeken, zal een aantal fusie-eiwitten worden gegenereerd. Met behulp van GFP (green fluorescent protein) en de confocale laser scanning microscoop zal de verdeling van de VE-cadherin en de catenins worden gevolgd in real-time. Naast GFP zal ook de green-to-red photoswitchable fluorescent protein Dendra worden gebruikt. Dit eiwit schakelt onomkeerbaar van groen naar rood wanneer het wordt blootgesteld aan intense 405 of 488nm. Door het fuseren van dit eiwit en VE-cadherin en de catenins, kan de verdeling van de plaatselijke VE-cadherin complex worden gevolgd in de tijd.

Technieken

  • Fusie-eiwitten maken met behulp van moleculaire biologie, waaronder PCR en het klonen van constructen.
  • Expressie wordt gecontroleerd met behulp van Western blotting en SDS-PAGE.
  • Confocale laser scanning microscopie om real-time opnames van VE-cadherine en catenine te maken.
  • Calcium-switch assays en trombine zullen worden gebruikt om de endotheel cel-cel verbindingen uit te dagen.

 

Laatst bewerkt op: 15 oktober 2015

Praktisch

Stage nummer
MCB-3

Afdeling
Moleculaire Cel Biologie

Duur
Zes maanden of meer

Gewenst profiel
Universiteit (master) of HLO student

Laatst bewerkt op: 15 oktober 2015

Contact

Ben je geïnteresseerd in het beschreven project? Neem dan contact op met de projectleider:

E: Dr. Jaap van Buul
T: 020 512 3250

Laatst bewerkt op: 15 oktober 2015